本发明属于水产养殖领域，具体涉及一种用于人工授精和家系建设的双壳类软体动物产卵和射精的方法。

背景技术：

埋藏的贝类栖息在沙子等软基质栖息地，有水管和发达的轴足类动物。水管用于滤食，轴足类在柔软的基质上挖洞。常见的埋藏贝类有菲律宾蛤、青蛤、蛤蜊、缢蛤、泥蛤、毛蛤等，埋藏深度随水管长度的不同而不同。这些沉水双壳贝肉质鲜美，经济价值很高，供需矛盾日益突出。随着国内外市场的进一步拓展，国内贝类养殖产量增加，养殖面积不断扩大。随着我国贝类养殖业的不断完善和发展，人工贝类养殖技术日益成熟，贝类养殖已成为我国水产养殖业的支柱产业之一。随着养殖密度和产量的增加，养殖过程中出现了产量下降、产品质量下降、大规模死亡等突出的产业问题。因此，贝类养殖业急需培育抗逆性强、生长快、品质优良的贝类新品种。家系构建是贝类育种过程中评价遗传力和培育新品种的最重要手段之一。

传统的贝类家族构建方法是选择正在射精、产卵的个体，放入小桶中逐个排出，然后将精子和卵子按比例倒入充气池中孵化。传统的贝类引产方法包括阴凉刺激，实际操作中费时费力。存在产卵时间长、成功率低、产卵量不稳定、产卵时间不同步等技术问题，需要工作人员长时间劳动。观察发现，家族之间极易发生交叉污染，直接影响家族选择过程。

技术实现要素：

为了解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种双壳类软体动物产卵和射精的诱导方法，有助于快速、高效地建立菲律宾蛤的全同胞和半同胞家族，具有很大的优点用于海洋贝类家族的建设。重要的应用价值。

一种诱导双壳类软体动物产卵和射精的方法。该方法的具体步骤如下：

1)用过滤海水配制成浓度为2mm的5-羟色胺(5-ht)，4℃避光保存；

2)预先在容器中加入纯净的过滤海水，并将温度比正常饲养温度提高3-8℃，以便将要诱导的亲鱼放入容器中；

3）选择腺体成熟的亲鱼，洗净后放入盘状容器中。将过滤后的海水加入到亲鱼壳宽度一半的圆盘形容器中，等待壳打开；

4)将步骤1)中制备的5-羟色胺注射到珍珠母贝的性腺中。将单个贝类注射成2-3份，每份0.8-1.2ml，然后放入步骤2）准备的容器中等待交付。卵子和射精。

本发明优选实施例中，步骤1)中，过滤后的海水为砂滤海水经过0.22μm微孔滤膜过滤后的海水。

步骤3)中，等待母牡蛎打开壳后，在上壳和下壳之间放置一个物体，以防止壳闭合。

作为本发明的另一个优选的实施例，步骤4)中，各个注射位点之间的距离大于1cm。

作为本发明的另一优选实施例，步骤4)中，通过强光照射亲本牡蛎排出的精子和卵子的形态并在显微镜下观察来判断雌雄。

本发明与现有技术相比的有益效果：

本发明的成熟亲鱼不需要在阴凉处干燥以进行刺激。将亲鱼单独放入容器中，使用5-羟色胺结合升温方法诱导生产。 30分钟内，亲鱼的产蛋率和射精率达到75%以上；与传统方法相比，本发明的方法不受时间限制，可以完全杜绝家庭之间的交叉感染。同时，精子的排卵和卵子的产生是同步的，持续的时间也很短，这就避免了需要人力持续关注卵子的产生和精子的排卵。

附图说明

图1 80分钟内各组精子排卵和产卵情况；

图2 各组精子排卵和产卵比例。

具体实施

为了使本发明的技术方案更加清楚，下面结合附图对本发明进行进一步详细的描述。此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

一种诱导菲律宾蛤产卵射精的方法，具体步骤如下：

1）使用菲律宾蛤蜊生长地区的海水来过滤海水。砂滤消毒后，用注射器连接0.22μm滤芯，将海水从滤芯中推出，用过滤后的海水配制浓度为2mm的5-HT（5-羟色胺）。 4°C 避光保存。

2）预先将过滤后的海水加入到1L透明桶（产卵桶）中，将水浴加热至比普通海水高7-8℃，即30±1℃，以准备待放入的亲蚝在桶里。 。

3) 将30只具有成熟选择性腺体的菲律宾蛤洗净并放入解剖盘中。在解剖盘中加入过滤后的海水至1厘米深，等待其打开壳（从加入海水到打开壳大约需要3天）。 -5分钟），将平头镊子两端置于上下壳之间。

4) 将步骤1)中制备的血清素注射到性腺中。将单个菲律宾蛤注射成 2-3 个部分。每个部位使用0.8ml 5-ht，注射部位之间的距离大于1cm。

5）实验完成后，放入2）中准备的小桶中。 30 分钟内，大多数个体会射精并产卵。当小桶有放电时，用强电光照射透明小桶来确定性别，并标记性别和放电时间。如果蛤蜊排出烟雾状物质，那就是精子；如果蛤蜊排出大小均匀的淡黄色颗粒状物质，那就是卵。在显微镜下观察，卵呈椭圆形，卵黄物质均匀，颜色较深，而精子活动力强，游动速度快，活力好。统计最终产卵和射精的次数和持续时间，计算引产成功率。蛤体内注射5-羟色胺后，大多数个体在30分钟内产卵并射精，精子射精和产卵率在75%以上。

6）预设气石充气，取少量精子和卵子按一定比例混合，放入5L家庭饲养容器中进行人工授精，保持充气持续，保持水温稳定，观察记录在显微镜下观察幼虫的发育情况，24小时后受精卵就会正常发育成D形幼虫。

实施例2

为了进一步证明5-羟色胺的引产作用，本例设置了四组实验，统计了菲律宾蛤在前80分钟的排卵和产蛋情况（每10分钟统计一次）。结果如图1和图2所示。a组：加热海水+注射5-羟色胺； b组：加热海水+注入海水； c组：不加热海水+直接注射5-羟色胺； d组：不加热海水+注入海水。实验a组个体在20分钟内射精产卵的比例最高，达到53.2%，远高于不加热海水的c组（16.7%）。 b组和d组均未产卵。实验结束时，a组总引产率达到85.3%，c组总引产率为75.0%，b、d组均低于5%。结果显示，注射5-羟色胺的A、C两个实验组，A组加热海水的诱导效果（射精和产卵时间更短、比例更高）明显优于未注射加热海水的C组。因此，通过将5-羟色胺注射到蛤体内，与加热的海水结合，使蛤在最短的时间内、最高的比例射精产卵，并能在短时间内获得高质量的精子和卵子，这是最适合菲律宾蛤的。引产方案可以取得良好的引产效果。

实施例3

一种诱导太平洋牡蛎产卵和射精的方法。具体步骤如下：

1）采用太平洋生蚝产区的海水，过滤海水。砂滤消毒后，用注射器连接0.22μm滤芯，将海水从滤芯中推出，用过滤后的海水配制浓度为2mm的5-HT（5-羟色胺），4℃保存℃，避光。

2）预先将过滤后的海水加入到1L透明桶（产卵桶）中。太平洋牡蛎亲鱼正常水温为18-20℃，引产加热水温为22-23℃，为亲鱼放流做好准备。放入小桶中。

3) 将30只具有成熟选择性腺体的亲鱼清洗并置于解剖盘中。在解剖盘中加入过滤后的海水至3厘米深，等待它们打开壳（从加入海水到打开壳大约需要3-5分钟）。 ），将平头镊子两端置于上下壳之间。

4) 将5-羟色胺注射到性腺中。将单个太平洋牡蛎分为2-3份，每份注射1.2ml 5-HT，注射部位之间的距离大于1cm。

5）实验完成后，放入步骤2）准备的小桶中。 30 分钟内，大多数个体会射精并产卵。当桶中的亲鱼放出时，通过用强力电灯照射透明桶，标记性别和放出时间来确定性别。如果亲鱼排出烟雾状物质，则是精子；如果排出的白色颗粒状物质大小均匀，那就是鸡蛋。在显微镜下观察，卵呈椭圆形，卵黄物质均匀，颜色较深，而精子活动力强，游动速度快，活力好。统计最终产卵和射精的次数和持续时间，计算引产成功率。太平洋牡蛎体内注射5-羟色胺后，大多数个体在30分钟内产卵并射精，精子射精和产卵率超过76%。

6）预设气石充气，取少量精子和卵子按一定比例混合，放入5L家庭饲养容器中进行人工授精，保持充气持续，保持水温稳定，观察记录在显微镜下观察幼虫的发育情况，24小时后受精卵就会正常发育成D形幼虫。

实施例4

本实施例以衣藻扇贝亲本贝为实施对象。

1）采用太平洋生蚝产区的海水，过滤海水。砂滤消毒后，用注射器连接0.22μm滤芯，将海水从滤芯中推出，用过滤后的海水配制浓度为2mm的5-HT（5-羟色胺），4℃保存℃，避光。

2）预先将纯净的过滤海水加入容器中。衣原体扇贝亲本的正常水温为16-18℃。引产时水温升至20-22℃，比正常饲养温度高3-4℃。 ，以便引产后将扇贝肉鸡放入容器中；

3）选择腺体成熟的亲鱼，洗净后放入解剖盘中。将衣藻扇贝壳宽度一半的过滤海水添加到解剖盘中。从加入海水到打开外壳大约需要3-5分钟；

4) 将5-羟色胺注射到性腺中。将单个衣原体扇贝分成2-3份，每份注入1.2ml，然后放入单独的容器中等待产卵和精子射精。

5）实验完成后，放入步骤2）准备的小桶中。 30 分钟内，大多数个体会射精并产卵。当小桶出现放电时，用强电光照射透明小桶来判断是公还是母，并标记公母和放电时间。 ，如果亲本牡蛎排出烟状物质，那就是精子；如果排出的是大小均匀的白色颗粒状物质，那就是鸡蛋。在显微镜下观察，卵呈椭圆形，卵黄物质均匀，颜色较深，而精子活动力强，游动速度快，活力好。统计最终产卵和射精的次数和持续时间，计算引产成功率。将5-羟色胺注射到扇贝体内后，大多数个体在30分钟内产卵并射精，精子射精和产卵率在75%以上。

6）预设气石充气，取少量精子和卵子按一定比例混合，放入5L家庭饲养容器中进行人工授精，保持充气持续，保持水温稳定，观察记录在显微镜下观察幼虫的发育情况，24小时后受精卵就会正常发育成D形幼虫。

实施例5

本发明的方法用于促进虾夷扇贝和海湾扇贝亲鱼的生产。 2mm 5-羟色胺用量为每份1.2ml。每个亲鱼分为3部分。最终产卵射精成功率达75%以上，精子与卵子结合后受精卵即可正常发育。